细菌诊断血清 : 细菌诊断血清是用已知的细菌免疫动物制成的含有大量相应抗体的血清,再经吸收处理得到因子分型血清,用于鉴定未知细菌。在进行流行病学调查、传染病的病原学诊断和食品检验等细菌学检查工作中,是鉴定细菌确诊感染所不可缺少的试剂。
传染病原体种类极多,诊断血清种类十分庞杂,本条只限于概述目前广泛大批供应的肠道和呼吸道致病菌诊断血清,其它细菌的诊断血清原则与此相近。
制备
学特性和抗原性良好的菌种,作为免疫原,按需要抗原应作处理后再用于免疫动物。
(2)免疫: 一般均用家兔静脉免疫4～7次间隔3～6日,末次注射后5～7日试血,滴度合格时大量采血,分离血清加1/万硫柳汞防腐。即为免疫血清。
(3) 吸收非特异性抗体: 由于动物血清中存在天然抗体,特别是由于某些细菌之间存在有共同的抗原,免疫血清中存在非特异性抗体,严重影响试验结果,必须吸收除去。吸收的方法大多是用有交叉反应的本种属的菌种制备菌悬液,离心将沉淀的菌体混入应进行吸收的血清中,置37℃作用3小时后离心除去菌体,吸收一次或多次后可制成特异的诊断血清,一般对于非同属的易于鉴别的细菌间的交叉抗体不进行吸收。
使用
(1)沙门菌属诊断血清:截止1976年沙门菌属已发现1900余型,计有O抗原67,H抗原H1-11,Ha-Hz62。我国迄今已检出100余型,其中95%以上属于A-F群。我国生产的沙门菌属诊断血清(因子血清)每套包括的品种可分4类(现在通用10种为1套因子血清): ①10种为1套的血清:包括A-F群多价O血清、vi血清、O因子血清2、4、7、9和H因子血清a、b、c、d,供伤寒或副伤寒甲、乙、丙菌诊断之用。②26种为1套的因子血清:除A-FO和vi 血清外,配有A-F六个群的单价O因子血清,2、4、7、8、9 、10 、11、15和19以及15种常用的H因子血清,可用于沙门菌种常见菌型的菌群鉴定和初步定型。适于一般基层医疗卫生单位使用。③57种为1套的因子血清: 与26种1套的比较,O因子血清又增加8种即1、5、14、20、27、34和46以及3、19,H血清增加至35种 (其中包括H多价4种)。可供常见菌型的定型之用。此套血清与目前国外的商品比较,种类是较多的,一般可满足省市级医疗卫生科研单位的工作需要。④全套沙门菌属因子血清:包括多价、单价、O、H、vi血清142种以上,是用国家菌种中心现有全部菌种制备的,国际上如有新的沙门菌(抗原)出现,一经交流获得,即应补加,保持全套。我国幅员广阔,有必要制出全套血清,供沙门菌中心和少数科研单位使用。
(2) 肠道致病性艾希大肠菌诊断血清: 大肠艾希菌现有O抗原1～164,H抗原1～56,K抗原1～100。能引起婴儿腹泻的菌型有O₂₆:B6;₄₄:L₇₄;O₅₅:B₅;O₈₆:B7; O111: B4; O112a,112C:B11; O119:B14; O124: B17; O125:B15; O126: B16; O127: B8; O128: B12; O28a,28C: K73; O143:KX₁; O₁₄₄: KK₂; O₁₄₆: K₈₇; O₁₈: B₂₀; O₁₈: B₂₁等。
肠道致病性大肠艾希菌诊断血清按下述二组供应:①15种一组的血清:包括OB多价1、2、3三个血清;12个OB单价血清包括O₂₄:B₆; O₄₄:L₇₄; O₅₅: B₅; O₈₆: B7;O111: B4; O112a,112C: B11; O119: B14; O124: B17; O125:B₁₅; O₁₂₆: B₁₆; O₁₂₇: B₈; O₁₂₈: B₁₂。②27种一组的血清:除上述OB多价及OB单价血清外,增加与OB单价相应的12种O单价血清。上述二组血清大体上能定出我国常见的肠道致病性大肠艾希菌。由患者粪便或其他材料分离在鉴别培养基上,疑似大肠菌时从生长较密处取培养物少许,先与OB多价血清作玻片凝集试验,阳性时,再以所属的OB单价血清按上法于原处取培养物作凝集试验以确定菌群。如与某一OB单价血清凝集,再以该血清与三个以上的单夥菌落作凝集试验,阳性时,选强凝集的菌落移种到三糖铁培养基上,经37℃培养18～20小时后,除观察发酵反应外,并制成浓厚的菌液,经100℃加热30分钟,再与相应的OB单价或O单价血清作玻片凝集试验,如仍为阳性反应,同时生化反应符合,即可作出初步诊断。
关于腹泻的主要病原菌——产肠毒素大肠菌的诊断,国内另有抗LT诊断血清,也有Y₁和CHO细胞可用。
(3)志贺菌属诊断血清: 志贺菌属到目前为止计有四个亚群39个血清型和亚型。目前供应的有二组血清:①19种一组的血清:包含痢疾志贺菌1型(志贺菌);2型(什密次);福氏志贺菌1～6型单价血清;群3、4;群6;群7血清;宋内菌血清;志贺菌属四种多价血清(包括志贺菌、什密次菌、福氏菌1～6型、宋内菌;痢疾志贺菌多价“1”血清(包括痢疾志贺菌3～6型);痢疾志贺菌多价“2”血清(包括痢疾志贺菌7～10型);福氏志贺菌多价血清(福氏菌1～6型); 鲍氏志贺菌多价“1”血清 (包括鲍氏菌1～6型); 鲍氏志贺菌多价“1”血清 (包括鲍氏菌1～6型);鲍氏志贺菌多价“2”血清(包括鲍氏菌7～11型)及鲍氏志贺菌多价“3 ”血清 (包括鲍氏菌12～15型)。这组血清适用于规模较大的医院和一般防疫检验部门,除少见的痢疾志贺菌及鲍氏菌不能分型外,其余均可作出型别诊断,特别是对福氏菌可作出详细的分型。②42种一组的血清,以上述19种一组的血清为基础,减去志贺菌属四种多价外,增加痢疾志贺菌3～10型单价血清:鲍氏菌1～15型单价血清及宋内菌1、2相(取消原有的宋内菌血清)血清42种。本组血清适用于科研机构,能诊断出志贺菌属的各菌型。由患者粪便或其他材料分离所得的革兰阴性杆菌,经初步生化学检查,疑似志贺菌属的菌株时,应分别用各种多价血清作玻片凝集试验,阳性时,应与其相应的单价或群因子血清作玻片凝集反应,若与单价或群因子血清呈现凝集可参照志贺菌属诊断抗原表及生化学特性作出菌型诊断。
(4) 霍乱弧菌诊断血清:①霍乱弧菌“O”多价诊断血清: 供诊断霍乱弧菌及副霍乱弧菌之用。②霍乱弧菌小川型及稻叶型诊断血清: 供已确诊为霍乱弧菌及副霍乱弧菌的菌株分型用,“O”多价诊断血清曾用较常见的水弧菌吸收过,特异性较佳。凡革兰阴性弧菌能分解蔗糖、甘露糖,不分解阿拉伯糖,疑似为霍乱弧菌或副霍乱弧菌的菌株,先用霍乱弧菌O多价血清作玻片凝集,阳性时再用稻叶及小川分型血清定型,并以生理盐水作对照应无自凝。O多价及小川型血清作玻片凝集时需以生理盐水稀释20倍。稻叶型血清稀释10倍使用。
(5)脑膜炎球菌诊断血清: 根据我国近年来研究证明我国流行菌群主要为A群,而带菌者主要为B群,C群引个新血清群,均已有诊断血清供应。它们是1889群、1890群、1892群、319群、1916群、1486群和1811群。现在已证明1889群与国外29E(Z′)群相同;319群与国外W₁₃₅群相同;1916群与国外X群相同。其余1890群、1486群和1811群为国外以往没有报告过的三个新菌群。国外的Z群菌株我国还未发现。
脑膜炎奈瑟菌诊断血清有: 多价Ⅰ诊断血清(内含A、B、C、D群);多价Ⅱ诊断血清(内含1889 、1890 、1892、319群);多价Ⅲ诊断血清(内含1916、1486、1811群)。单价分群诊断血清计11种,有A、B、C、D、1889、1890、1892、319、1916、1486和1811。此组血清可定出我国流行的脑膜炎奈瑟菌群。鉴定细菌时将菌落、涂片、染色镜检为革兰阴性双球菌者,先用多价血清作玻片凝集试验,以确定菌群。应以生理盐水作对照,观察有无自凝。
(6) 百日咳菌Ⅰ相诊断血清:本血清只一种,供诊断Ⅰ相百日咳菌用。①玻片凝集反应:于玻片上放置稀释20倍血清-铂环,取被检菌苔少许与血清充分混匀,摇动玻片,呈阳性反应时以生理盐水作对照。②定量凝集试验:按肥达反应操作。