肥达及外裴反应诊断抗原 : 肥达及外斐反应诊断抗原是用标准菌株的培养物加甲醛杀菌制成的菌悬液(抗原)。检查病人血清中有无相应抗体,用于诊断伤寒、副伤寒或斑疹伤寒。使用的细菌是伤寒、副伤寒杆菌和变形杆菌。
伤寒、副伤寒杆菌诊断菌液计有伤寒“O”“H”及副伤寒甲、乙、丙五种菌液。变形杆菌诊断菌液计有变形杆菌OX1₉、OX₂、OX_k三种菌液。
制备 选择光滑型,凝集性强,并具有典型培养、血清学和生化反应特性的菌株用于生产,用凝集试验进行血清学检查时,应呈强阳性反应,其中丙型副伤寒菌应与Vi血清呈阴性反应,伤寒H901不应与相应的H血清起凝集反应,乙、丙型副伤寒菌应选第1相菌,作定量凝集时,与相应血清的效价不得低于原血清效价的1/2,变形杆菌OX₁₉与斑疹伤寒立克次体家兔免疫血清的凝集反应不应低于1/2。伤寒、副伤寒菌与其诊断血清的交叉凝集,不应超过1∶100,变形杆菌与其诊断血清的交叉凝集,不应超过1∶40 ,OX19与变形杆菌鞭毛H1血清1∶20时应为阴性。
制备菌液时将上述菌株分别接种于普通琼脂 (伤寒H901用液体培养物接种于软琼脂培养基。变形杆菌则应采用无凝固水的较干的琼脂培养基)。37℃培育18～20小时,将菌苔括入瓶内,用缓冲生理盐水稀释成适宜浓度,加入0.5～1%甲醛杀菌,制成的菌液经无菌试验,纯度及血清学检查合格后即可稀释成每毫升含70亿个菌的悬液,进行分装。
使用方法 以生理盐水将菌液稀释成每毫升含7亿个菌的悬液,并将患者血清倍比稀释成1∶10～1∶1280(每管0.5ml),然后逐管分别加入菌液各0.5ml,(肥达反应加伤寒O、H,副伤寒甲、乙、丙型菌液,外斐反应加变形杆菌OX₁₉、OX₂及OX_k菌液),充分振荡,使其混均,于37℃放置16～20小时判定结果。
根据凝集反应的强弱或有无,分别以(++++)、(+++)、(++)、(+)、(-)记录,以肉眼可见的(+)的血清最高稀释度为终点滴度。
伤寒患者一般在发病的第8天至第10天,出现阳性肥达反应,未接种过伤寒、副伤寒甲、乙三联菌苗者,在发病二周后对伤寒“H”和“O”滴度达1∶100以上方有诊断意义,接种过三联菌苗者在一个相当长的时期内(甚至经年),H凝集素约维持在1∶50～1∶200的滴度,因而在诊断上价值不大,O凝集素滴度不高且维持时间亦较短,一般不超过数周或数月,但在诊断上较H凝集素重要。如果双份血清O效价有4X以上增长,则具有确诊意义。
斑疹伤寒患者血液中的凝集素约在第4天即可出现,约至第2周和第3周开始即出现高峰,至恢复期滴度迅即下降,五个月后几乎可以全部消失,通常滴度至1∶160以上有诊断价值。OX19及OX2用于斑疹伤寒诊断,OX_k用于恙虫热诊断。