肠道病毒诊断血清

2020-08-29 食功效-药物药理学 https://www.shigongxiao.com

  肠道病毒诊断血清 : 肠道病毒是脊髓灰质炎Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型,柯萨奇A组1-24型、B组1-6型以及埃柯(ECHO) 1-34型病毒的总称。用各种型的病毒分别免疫动物,使动物产生相应抗体,以中和试验方法鉴别未知肠道病毒的抗血清,统称为肠道病毒诊断血清。
肠道病毒的血清型相当复杂,现已知: ①柯萨奇A23型与埃柯9型属于同一型病毒,现统称埃柯9型。②柯萨奇A3与A8、A11与A15、A13与A18之间有交叉抗原。③埃柯1型与8型具有共同抗原,埃柯1型抗原谱较广。④埃柯10型现被划为呼吸道肠道(Reo)病毒第1型。⑤埃分中和柯萨奇A24型病毒,但柯萨奇A24型病毒抗血清不能中和埃柯3i A34病毒的原始株。⑦从第68型起,新发现的肠道病毒不再进一步命名为脊髓灰质炎、柯萨奇或埃柯病毒,而统一命名为肠道病毒第×型。
诊断血清的制备
(1) 用于组织培养中和试验定型的诊断血清: 制备抗原的毒种,经标准诊断血清标化,无交叉抗原,方可用以制备诊断血清。毒种接种细胞培养,制成病毒悬液,经物理及化学方法处理制成浓缩抗原。用浓缩抗原加福氏佐剂免疫动物。家兔、羊和马均可作为免疫用动物,动物经3~5次免疫后可取血测定血清效价,效价满意即可放血。每只动物的血分开放置。所得单型血清按需要量配制成组合血清,或按1~2毫升分装于安瓿中,放-20℃低温保存或冷冻干燥后放4℃保存。血清保存时间约2年左右,超过2年,如血清效价无明显降低,仍可继续使用。用前血清于56℃经30分钟灭活。

A-H组合血清的配制和定型结果判定表

组别
血清型
A B C D E F G H 中和的组别
柯萨奇 A7
A9
A16
B1
B2
B3
B4
B5
B6
x x       AB
  x     x  BG
        x H
x  x      AC
  x  x     BD
   x    x  CG
x    x    AE
   x  x    CE
      x  x FH
埃柯 1
2
3
4
5
6
7
9
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
29
30
31
32
33
x       x AH
  x x      BC
  x      x BH
x      x  AG
x    x  x  AEG
   x x     CD
x     x   AF
  x    x  x BFH
     x    E
   x     x CH
    x x    DE
    x  x   DF
x        A
    x   x  DG
     x  x  EG
     x x   EF
  x    x   BG
      x x  FG
  x       B
     x   x EH
       x x GH
   x      C
    x     D
  x  x  x   BDF
      x   F
x  x   x   ACF
   x  x  x  CEG
       x  G
    x x   x DEH
x   x     AD

注: ① 各组血清由纵行带×的单价血清混合配成。

② 埃柯8、10及28血清型未包括在内。

J-P组合血清的配制和定型结果判定表

组别
血清型
J K L M N O P 中和的组别
柯萨奇 A1
A2
A3
A4
A5
A6
A8
A10
A11
A12
A13
A14
A15
A17
A18
A19
A20
A21
A22
x       J
  x x     KL
      x x OP
x      x JP
x    x   JN
   x     L
       x P
      x  O
  x   x   KN
x   x x   JMN
    x    M
x     x  JO
  x      K
  x    0  KO
   x x    LM
    x   x MP
x  x     JL
    x x   MN
   x   x  LO

注: ① 各组血清由纵行带×的单价血清混合配成

② 柯萨奇A23、A24血清型未包括在内


血清的检定包括以下各项: ①无菌试验。②物理检查。③效价测定: 将不同稀释度的血清 (从1∶320或以上开始)与100TCID50/ml同型病毒等量混合,用组织培养中和试验方法,测定中和抗体的效价。血清效价一般不应低于1∶1280。④交叉中和试验:将血清稀释成1∶50,与100TCID50/ml的异型或异种病毒作交叉中和试验。一般1∶50的血清不应中和100TCID50/ml的异型或异种病毒,如发生中和现象,应将该血清连续2倍稀释,分别加入等量的异型或异种病毒。如果对异型或异种病毒的交叉中和滴度未超过该血清效价的40个中和单位的稀释度时,仍认为合格,如超过40个中和单位的稀释度,则为不合格。⑤毒性试验: 每只动物的血清稀释成1∶10,各取0.2毫升接种2支,种于0.8毫升维持液的细胞管,置37℃培养7天,观察细胞有无脱落现象。
(2) 用于乳鼠中和试验定型的诊断血清: 用乳鼠制备的抗原包括柯萨奇A组病毒 (柯萨奇A7、A9、A16型除外),必要时还包括B组病毒。每型毒种以腹腔及皮下同时注射乳鼠一窝,A组病毒用2天龄的,B组病毒用1天龄的,每窝以7~8只为宜,注射量各为0.03ml。待出现典型症状后,立即将病鼠取出处死,经乙醚消毒后,剥去皮肤,将躯体及四肢的肌肉和骨胳用无菌生理盐水制成20%悬液,经1000转/分离心10分钟,上清即为抗原。
在制备血清前,应检查每型抗原的型特异性,即用同型及异型的标准诊断血清(1∶10)与各型抗原(10-3)用乳鼠作中和试验,各型抗原仅被同型诊断血清中和方为可靠。
将20%乳鼠肌肉悬液抗原加1毫升佐剂 (成分同前)混合后,免疫豚鼠或地鼠制成免疫血清,免疫血清经无菌试验、物理检查、效价测定、交叉中和试验、毒性试验等项检查,测定效价,特异性试验及毒性检定均用乳鼠进行。检定合格的血清按需要量配制成组合血清或按1毫升分装于安瓿,在-20℃低温冰箱保存,或冷冻干燥后于4℃保存。用前血清在56℃经30分钟灭活。
诊断血清的应用
(1)单价血清: 根据各型诊断血清的中和效价,按40个中和单位稀释后使用。为方便起见,一般效价在1∶5,000~10,000或以上者作1∶100稀释,效价在1∶2,000~5,000以下者作1∶50稀释,效价在1∶2000以下者作1∶30稀释。
(2)组合血清:根据Lim等原理,将现有型别的肠道病毒单价诊断血清(脊髓灰质炎病毒除外),分别配制成A-H 8个组合血清组及J-P7个组合血清组。在各组中每型血清均含有40个中和单位。使用组合血清之前不必再作稀释。A-H及J-P组合血清的配制和定型结果判定见上表。
用组合血清鉴定病毒很简便,A-H组包括39个血清型,鉴定某一未知病毒用A-H8种血清即可,如该病毒可被A组及B组中和则该病毒为柯萨奇A7型。

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