免疫球蛋白诊断血清

2020-08-29 食功效-药物药理学 https://www.shigongxiao.com

  免疫球蛋白诊断血清 : 免疫球蛋白(Ig)诊断血清是将Ig注射给异种动物所制出的富有其抗体的特异性血清,能与抗原Ig发生特异性反应。目前大量供应的有7个品种,即人IgG、IgA、IgM、IgD、IgE、轻链κ和λ的诊断血清。
虽然有一小部分异常的Ig不具有抗体活性,Ig一词一般相当于抗体,但由其结构(见图)可知Ig除具有起抗体作用的抗原结合部位之外,还有Fc段具有抗原性,这就是能够制出Ig诊断血清的根据。按Ig的主要性状(见表)、可分为五类,其中有三类还可以按结构与性状再分出亚类,由于机体的体液免疫是由Ig构成的,所以用Ig诊断血清检测分析机体的Ig,是医疗保健工作的常规检验项目,十分重要。由于Ig是抗体Ig诊断血清又是抗抗体,通称第二抗体,它是许多种高敏感性血清学试验中不可缺少的试剂,已广泛应用于医学生物学的各个领域。

Ig分子构造模式图

免疫球蛋白的理化性状

分 类 IgG IgA IgM IgD IgE
H链 r
4
α
2
μ
2
δ ε
亚类 IgG1,IgG2 IgG3,IgG4 IgA1,IgA2 IgM1,IgM2  
α链 k,λ k,λ k,λ k,λ k,λ
分子量 160,000 160,000 900,000 180,000 200,000
沉降系数 7S 7S(9、11、13、17S) 19S 7S 8S
电泳迁移率 r2-α2 γ1-β2 γ1-β2 γ1-β2 γ1-β2
血清中含量 600-1600 20~500 60~200 0.1~4.0 0.01~1.4
平均值mg% 1200 200 120 3.0 0.3
占血清蛋白的总量% 18 3.0 1.6 很少 很少
占Ig总量% 70~80 9~14 6~9 0.2~1 0.002
合成速度mg/kg/d 33 6.7 24 0.4 0.02
半寿期开始形成 23 5.1 5.8 2.8 2.3
出生后3个月 胎儿末期 出生后4~6个月 较晚 较晚
血清含量达正常值 5岁 1/2~1岁 4~12岁  
通过胎盘 + - - - -
主要作用 体液免疫 粘膜局部免疫 体液免疫  I型变态反应


用途 主要用于诊断机体的Ig失常和用作第二抗体(见“标记第二抗体”条)。机体Ig失常可分为低或无Ig血症和高Ig血症两大类:(1)低或无Ig血症:有先天性和继发性两类,前者包括Bruton型体液免疫缺陷症与X性染色体隐性遗传有关。血中Ig总量不足200mg/100ml,IgG为正常水平的1/10,IgM和IgA仅及1/100,因不能产生循环抗体,对化脓性细菌高度易感。瑞士型则更进一步,也不产生细胞免疫,常于出生后两年内反复感染致死。有一些患者的Ig合成并非全面缺损,而是部分失常,一类或几类Ig含量极低,而其他则正常甚至稍高,这多与X性染色体隐性遗传有关。有的发生于运动失调性毛细血管扩张症。继发性低Ig血症常见于免疫系统肿瘤患者,各类Ig合成受到影响,长期使用免疫抑制剂,抗肿瘤、抗代谢药和放射疗法,均可能使患者发生暂时性低Ig血症。肾病综合征中Ig由肾大量流失,可能造成低IgG,蛋白丢失性胃肠病可能导致各类Ig水平低。
Ig血症:血液中出现了大量的单克隆Ig,通称为M蛋白,无抗体活性,患者系多发性骨髓瘤或巨球蛋白血症。多发性骨髓瘤是单克隆Ig血症中最多的,分为IgG、A、D、E四型,以IgG型为最多,病因是产生并分泌Ig的浆细胞中某一克隆受刺激形成肿瘤样恶性增殖,骨质中有广泛的浆细胞浸润,血液中出现M蛋白,常超过2g/100ml,尿中出现本周(B-J)蛋白,即游离的Ig轻链,多发性骨髓瘤患者血液中的正常Ig含量减低; 巨球蛋白血症的M蛋白是IgM,也是单克隆(分泌IgM)的浆细胞过度增殖所致;患者为慢性淋巴网织系统的恶性肿瘤,尿中有本周蛋白,血中还能有7S的IgM单体,对上述患者使用Ig诊断血清,查明M蛋白,配合症状即可确诊。此外,还有极为少见的重链病、轻链病和半分子病,这类型的骨髓瘤瘤细胞分泌大量的重、轻或Ig半分子,病因可能与Ig分子CH1区和CH2区基因部分缺失,个别氨基酸失常以致不能形成应有的二硫键有关,除需要用Ig诊断血清进行诊断分析外,还需要测定分子量,作酶解试验等才能确诊。单克隆高Ig血症也可能是良性、暂时的,见于老年人,随年龄而发生率增高,如变为持久性的则将转变为恶性骨髓瘤,应密切观察。②多克隆高Ig血症: 常见于自身免疫病、肝病等,有些可能与遗传有关,表现为多类Ig明显增多,用Ig诊断血清查明有辅助诊断意义。
Ig诊断血清的制备 免疫原需使用高度提纯的Ig,它们的原料分别是: IgG多用血液,IgA多用初乳,IgM可用巨球蛋白血症患者血清,上述三种免疫原亦可用低温酒精法血液制剂的中间品制备,IgD和IgM因血液中含量很少,使用多发性骨髓瘤患者血清为原料,制备过程中使用硫酸铵盐析,葡聚糖凝胶过滤,离子交换柱层析和亲和层析等方法多步提纯,达到扩散试验及免疫电泳纯时供免疫使用,动物多选用兔,羊或驴及马,以微量抗原淋巴结免疫法注入加佐剂的抗原,再反复加强二,三次,多能获得高效价的Ig诊断血清,由于免疫原仍含极微量的其它血浆蛋白,需以固相吸附剂或免疫吸附 (亲和层析)柱纯化,除去杂抗体,达到扩散试验和免疫电泳纯,以实用稀释度亦可使用于放射免疫自显影等。
使用方法 测定IgG、IgA和IgM时,一般多用免疫单扩散法;测定IgE、IgD及粘膜分泌液中的sIgA等因量较少或极少,需用更为敏感的方法:①单扩散法:将Ig诊断血清均匀地混于琼脂中。制成免疫板,检品加至挖好的小孔内,置湿盒中37℃扩散24~48小时,出现的抗原抗体结合物沉淀圈,直径大小与其中抗原Ig含量呈函数关系,故用已知抗原制成的标准曲线作为对照,可以求出检品中Ig的含量。②火箭电泳法: 在免疫板上加检品,不进行扩散,立即进行电泳,抗原Ig定向迁移,抗原抗体比例适合,则在短时间内出现沉淀峰,用已知抗原作对照,可求出检品内Ig含量,此法比较敏感,但尚不能检出含量极少的IgE等。③放射免疫自显影法: 先用125I或131I标记提纯的Ig诊断血清,再制备免疫板,加检品做扩散之后,先用盐水漂涤去游离的抗体,再用X光底片进行自显影,抗原抗体复合物的放射性使底片上出现沉淀圈,此法很敏感,可用于测定血清中的IgE含量。④放射免疫分析法和酶联免疫试验:分泌物中的IgE等含量极微时,需用这两类最敏感的方法进行检测,放射免疫分析由于使用核素,须有防护措施。近几年来,国内建立了检测IgE、IgD和分泌液中IgA的酶联免疫试验技术,已用于诊断I型变态反应,研究呼吸道,肠道感染免疫机理等。
以上均为定量或半定量试验,此外有定性试验,如免疫双扩散和免疫电泳等,这两类方法在分析研究Ig时非常重要,但日常工作中却不常用。

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