结核菌素

2020-08-29 食功效-药物药理学 https://www.shigongxiao.com

  结核菌素 : 结核菌素(tuberculin)主要有旧结核菌素(OT)和精制结核菌素(PPD)两类。旧结核菌素是结核分枝杆菌在甘油肉汤或综合液体培养基中生长和溶解的可溶性产物的浓缩液。精制结核菌素则是由其中分离提取出的蛋白质。结核菌素用于作变态反应,诊断机体有否结核杆菌感染和接种卡介苗是否成功,亦可用以推断机体细胞免疫功能是否低下。
OT在我国已有几十年的生产历史,PPD在50年代有几个单位试制和使用过,1983年正式批量生产。制备OT方法简易,性质稳定,耐长期保存。
OT中含有菌体代谢自溶的一切耐热性组分和培养基成分,不纯,经高倍稀释(2000~10,000倍)后用于测定结核菌感染所致的迟发性变态反应,仍是安全可靠的制品。PPD比OT纯净,所含非蛋白成分很少,应该指出其中的蛋白质并不是均一的。获得成分均一的结素蛋白,弄清其化学结构及氨基酸组成等都是进行研究的课题。
OT和PPD都有国际标准,由WHO颁发,OT第三国际标准为90,000IU/ml,PPD-S为50,000IU/mg,但因(冻干)安瓿中尚含原缓冲液中的盐类,所以PPD-S为1IU=0.000028mg。
OT和PPD非常稳定,如稀释至使用浓度 (2000~10000倍)就易于失效,OT稀释液的效期为6周,PPD更短。PPD稀释液成品,含有稳定剂(吐温80,0.0005%),有效期半年。一般认为OT5IU大体相当于PPD-S2IU(加吐温)。
OT和PPD都需要经过一系列的检定,其中的效价检定比较复杂。往往要以人体试验,应包括新生儿卡介苗接种后的阳转率测定、流行病学调查和患者结素试验结果来评定效价。下表为一批标准品的人体标化结果。
机体感染结核杆菌后,由于T淋巴细胞受抗原刺激而致敏,再次接触结核蛋白时就会产生淋巴因子发生结核菌素反应,这是一种属于细胞免疫应答范畴的迟发性超敏现象。一般表现为局部反应,患者敏感性很高而OT又用量过大时,偶尔发生病灶反应乃至全身反应,应当注意避免。OT的使用剂量因对象有不同,各国也不完全一致。我国在新生儿用5IU/0.1ml (皮内法),作流行病学调查时成人用量以1IU为适宜。青少年可用5IU,对患者进行诊断时,考虑到有些人细胞免疫功能低下,推荐用多剂量法,例如用1,10,100IU作三次,才能作出反应阴性的诊断。接种方法在我国一般推荐皮内法即曼

PPD-C的人体标化(1981~1982)

试验对象 人数 制剂 剂量
IU
阳性率
%
反应平均直径
(mm)
新生儿
(卡后阳转试验)
78 PPD-S
PPD-C
5
5
76.9
85.9
7.85
8.80
新生儿
(未种卡)
134 PPD-S
PPD-C
5
5
95.6
95.6
4.07
4.12
儿童
(未种卡)
80 PPD-S
PPD-C
2
2
94
94
7.52
7.57
患者 20 PPD-S
PPD-C
1
1
100
100
14.75
14.3

注:PPD-S是WHO发来的标准品

PPD-C是我国产品


它反应,注射于前臂曲侧中部,其它国家还有用多孔刺压法、喷压法、皮上敷贴法或油膏法等等,接种后48~72小时观查结果,皮内法在我国以出现硬结≥5mm(OT)为阳性反应,美国规定皮内法5IU≥10mm为阳性5~9mm为可疑,因为他们那里有一些非典型分枝杆菌的流行,造成相当数量的交叉反应,其它国家情况不尽相同,阳性标准也不一致,用PPD2IU+吐温80者,反应多以≥6mm为阳性。
结核菌素试验本质是细胞免疫应答,因此近年来检测细胞免疫功能也常用OT试验,认为反应阴性者表明该对象的细胞免疫功能低下。应当指出,近些年来结核病受到控制,患者数量大为减少,卫生水准日益提高,以致有些成年人也并未接触过结核菌,因此,尽管细胞免疫功能正常也有可能不出现结素阳性反应。同理,如果检测对象细胞免疫功能低下,即使是结核感染者也会是结素反应阴性,这些均应加以注意和分析。
结核菌素反应和一般诊断用的各种试管反应不同,是人体试验,又常用于人群,在我国一年达数十万人次,对剂量、稀释、用具等均应严格遵守说明书使用。