巴戟天
巴戟天 : 巴戟天为茜草科植物巴戟天Morinda officinalis How的干燥根。主要含有蒽醌类、氨基酸类和多糖类等
成分。
蒽醌类有效部位及成分
【总蒽醌】
提取分离
检识测定
方法一: 可见分光光度法
方法1:
标准曲线制备: 精密吸取1,8-二羟基蒽醌储备液 (0.1%) 1.00,2.00,3.00,4.00,5.00mL置小烧 杯中,水浴挥尽氯仿,以5.0%氢氧化钠溶液20mL分次洗涤烧杯,洗液置25mL量瓶中,定容,显色,90 分钟后以氢氧化钠为空白,于500nm波长处测定吸收度,绘制标准曲线。
样品测定:精密称取巴戟天粉末1g,加入2.5mol/L硫酸溶液30mL回流2小时,稍冷后加氯仿30mL 继续回流1小时,滤出提取液,冷却后氯仿萃取,分出氯仿液,酸液再以氯仿 (10mL×3) 萃取,合并氯 仿液,水洗(10mL×3),浓缩后定容至10mL。精密量取2.00mL,按标准曲线制备方法测定,计算含量。
方法2:
标准曲线制备: 精确吸取1,8-二羟基蒽醌乙醚液 (0.1mg/mL) 0.50,1.00,1.50,2.00,2.50, 3.00,3.50mL,置25mL量瓶中,挥去乙醚,残渣用0.5%醋酸镁甲醇溶液溶解并稀释至刻度,摇匀,于 498nm测定吸收度,绘制吸收度-浓度标准曲线。
样品测定:精确称取巴戟天样品1g,置圆底烧瓶中,加入2.5mol/L硫酸溶液30mL回流水解2小时, 冷却,过滤,滤液加入氯仿萃取,滤渣再加入氯仿回流提取1小时,合并氯仿液。用少量蒸馏水将氯仿液 洗至中性,弃去水相,挥干氯仿,残渣加醋酸镁甲醇溶液溶解,定量转移至25mL量瓶中,定容,摇匀, 于498nm处测定吸收度,由标准曲线计算总蒽醌含量。
方法3:
标准曲线制备: 精密量取甲基异茜草素-1-甲醚对照品溶液 (0.2mg/mL) 0.50,1.00,1.50,2.00, 3.00,3.50mL分别置10mL量瓶中,水浴蒸尽甲醇,残渣用0.5%醋酸镁甲醇液溶解并稀释定容至刻度, 摇匀,30分钟后,以0.5%醋酸镁甲醇液为空白,于470nm处测定吸收度,绘制吸收度-浓度标准曲线。
游离蒽醌的含量测定: 精密称取样品5g,加氯仿100mL回流提取4小时,过滤,滤渣再加氯仿50mL, 回流1小时,合并滤液。加5%氢氧化钠150～200mL分次提取至水层无色,合并碱水液,盐酸酸化,再用 氯仿萃提数次至水层近无色,合并氯仿层,水洗数次,蒸干氯仿层,加适量0.5%醋酸镁甲醇液溶解并定 量转移至10mL量瓶中,稀释至刻度,以0.5%醋酸镁甲醇液为空白,于470nm处测定吸收度,由标准曲线 计算含量。
结合蒽醌的含量测定: 精密称取样品5g,加氯仿100mL与20%硫酸10mL,水浴回流4小时,抽滤 后,滤渣再用酸性氯仿回流1小时,合并滤液,冷却后分出氯仿层。从“加5%氢氧化钠” 起,按“游离 蒽醌的含量测定” 项下,提取测定,得总蒽醌的含量。由总蒽醌含量减去游离蒽醌含量,即得结合蒽醌 含量。
【甲基异茜草素-1-甲醚】
结构式
提取分离
工艺一:
【注1】 先后以石油醚,石油醚-乙酸乙酯 (10:1～8:2～6:4),甲醇洗脱,合并石油醚-乙酸乙酯 (10:1) 成分相近洗脱部分,浓缩,析晶。
工艺二:
【注2】 在硅胶加压柱上以石油醚-乙酸乙酯溶剂系统梯度洗脱。
检识测定
薄层色谱法
注: 加*号者仅为检识用。
氨基酸类有效部位及成分
【总氨基酸】
提取分离
【注3】 732型强酸性阳离子变换树脂柱,蒸馏水洗至无色后1%氨水溶液洗脱 (至茚三酮反应为阴性)。
【注4】 95%乙醇溶解,滤去不溶物,蒸尽乙醇,少许活性炭脱色。
多糖类有效部位及成分
【总多糖】
提取分离
【注6】 加入95%乙醇使其终浓度为80%,静置过夜,收集沉淀。
检识测定
分光光度法
标准曲线制备: 精密量取葡萄糖标准液 (100μg/mL) 0,0.10,0.20,0.30,0.40,0.50,0.60, 0.70mL于25mL具塞比色管中,加蒸馏水至2.00mL,再各加5%苯酚溶液1.60mL,摇匀,迅速加入H2SO4 溶液7.50mL,振摇5分钟,放置10分钟,置沸水浴中加热20分钟,取出冷却至室温。以试剂空白为参 比,于488nm测定吸光度,绘制吸收度-浓度标准曲线。
样品测定: 精密称取巴戟天样品0.2g,置圆底烧瓶中,加80%乙醇150mL,90℃水浴回流1小时,过 滤,残渣用热80%乙醇洗涤3次,每次10mL。残渣连同滤纸置烧瓶中,加蒸馏水150mL,90℃水浴加热提 取1小时,过滤,残渣用热水洗涤4次,每次10mL,洗液与滤液合并,放冷,定量转移至250mL量瓶中并 稀释至刻度,得样品供试液。精确量取一定量样品供试液,置25mL具塞比色管中,按标准曲线制备方法 测定,计算含量。
蒽醌类有效部位及成分
【总蒽醌】
提取分离
检识测定
方法一: 可见分光光度法
方法1:
标准曲线制备: 精密吸取1,8-二羟基蒽醌储备液 (0.1%) 1.00,2.00,3.00,4.00,5.00mL置小烧 杯中,水浴挥尽氯仿,以5.0%氢氧化钠溶液20mL分次洗涤烧杯,洗液置25mL量瓶中,定容,显色,90 分钟后以氢氧化钠为空白,于500nm波长处测定吸收度,绘制标准曲线。
样品测定:精密称取巴戟天粉末1g,加入2.5mol/L硫酸溶液30mL回流2小时,稍冷后加氯仿30mL 继续回流1小时,滤出提取液,冷却后氯仿萃取,分出氯仿液,酸液再以氯仿 (10mL×3) 萃取,合并氯 仿液,水洗(10mL×3),浓缩后定容至10mL。精密量取2.00mL,按标准曲线制备方法测定,计算含量。
方法2:
标准曲线制备: 精确吸取1,8-二羟基蒽醌乙醚液 (0.1mg/mL) 0.50,1.00,1.50,2.00,2.50, 3.00,3.50mL,置25mL量瓶中,挥去乙醚,残渣用0.5%醋酸镁甲醇溶液溶解并稀释至刻度,摇匀,于 498nm测定吸收度,绘制吸收度-浓度标准曲线。
样品测定:精确称取巴戟天样品1g,置圆底烧瓶中,加入2.5mol/L硫酸溶液30mL回流水解2小时, 冷却,过滤,滤液加入氯仿萃取,滤渣再加入氯仿回流提取1小时,合并氯仿液。用少量蒸馏水将氯仿液 洗至中性,弃去水相,挥干氯仿,残渣加醋酸镁甲醇溶液溶解,定量转移至25mL量瓶中,定容,摇匀, 于498nm处测定吸收度,由标准曲线计算总蒽醌含量。
方法3:
标准曲线制备: 精密量取甲基异茜草素-1-甲醚对照品溶液 (0.2mg/mL) 0.50,1.00,1.50,2.00, 3.00,3.50mL分别置10mL量瓶中,水浴蒸尽甲醇,残渣用0.5%醋酸镁甲醇液溶解并稀释定容至刻度, 摇匀,30分钟后,以0.5%醋酸镁甲醇液为空白,于470nm处测定吸收度,绘制吸收度-浓度标准曲线。
游离蒽醌的含量测定: 精密称取样品5g,加氯仿100mL回流提取4小时,过滤,滤渣再加氯仿50mL, 回流1小时,合并滤液。加5%氢氧化钠150～200mL分次提取至水层无色,合并碱水液,盐酸酸化,再用 氯仿萃提数次至水层近无色,合并氯仿层,水洗数次,蒸干氯仿层,加适量0.5%醋酸镁甲醇液溶解并定 量转移至10mL量瓶中,稀释至刻度,以0.5%醋酸镁甲醇液为空白,于470nm处测定吸收度,由标准曲线 计算含量。
结合蒽醌的含量测定: 精密称取样品5g,加氯仿100mL与20%硫酸10mL,水浴回流4小时,抽滤 后,滤渣再用酸性氯仿回流1小时,合并滤液,冷却后分出氯仿层。从“加5%氢氧化钠” 起,按“游离 蒽醌的含量测定” 项下,提取测定,得总蒽醌的含量。由总蒽醌含量减去游离蒽醌含量,即得结合蒽醌 含量。
【甲基异茜草素-1-甲醚】
结构式
甲基异茜草素-1-甲醚
提取分离
工艺一:
【注1】 先后以石油醚,石油醚-乙酸乙酯 (10:1～8:2～6:4),甲醇洗脱,合并石油醚-乙酸乙酯 (10:1) 成分相近洗脱部分,浓缩,析晶。
工艺二:
【注2】 在硅胶加压柱上以石油醚-乙酸乙酯溶剂系统梯度洗脱。
检识测定
薄层色谱法
薄层色谱条件一览表
| 吸附剂 | 展开剂 | 显色方法 | 对照品 | 检测波长(nm) | 检测药物 |
| 硅胶G |
环己烷-乙酸乙酯-二氯甲烷-甲醇
(21:9:3:2滴) | 紫外光 | 甲基异茜草素-1-甲醚 | * | 巴戟天 |
| 硅胶GF254 |
乙酸乙酯-甲醇(4:1)
氯仿-乙酸乙酯(4:1) | 紫外光 | 甲基异茜草素-1-甲醚 | * | 巴戟天 |
| 硅胶GF254 | 苯-乙酸乙酯-甲酸(8:2:0.1) | 紫外光 | 甲基异茜草素-1-甲醚 | 280 | 巴戟天 |
注: 加*号者仅为检识用。
氨基酸类有效部位及成分
【总氨基酸】
提取分离
【注3】 732型强酸性阳离子变换树脂柱,蒸馏水洗至无色后1%氨水溶液洗脱 (至茚三酮反应为阴性)。
【注4】 95%乙醇溶解,滤去不溶物,蒸尽乙醇,少许活性炭脱色。
多糖类有效部位及成分
【总多糖】
提取分离
【注6】 加入95%乙醇使其终浓度为80%,静置过夜,收集沉淀。
检识测定
分光光度法
标准曲线制备: 精密量取葡萄糖标准液 (100μg/mL) 0,0.10,0.20,0.30,0.40,0.50,0.60, 0.70mL于25mL具塞比色管中,加蒸馏水至2.00mL,再各加5%苯酚溶液1.60mL,摇匀,迅速加入H2SO4 溶液7.50mL,振摇5分钟,放置10分钟,置沸水浴中加热20分钟,取出冷却至室温。以试剂空白为参 比,于488nm测定吸光度,绘制吸收度-浓度标准曲线。
样品测定: 精密称取巴戟天样品0.2g,置圆底烧瓶中,加80%乙醇150mL,90℃水浴回流1小时,过 滤,残渣用热80%乙醇洗涤3次,每次10mL。残渣连同滤纸置烧瓶中,加蒸馏水150mL,90℃水浴加热提 取1小时,过滤,残渣用热水洗涤4次,每次10mL,洗液与滤液合并,放冷,定量转移至250mL量瓶中并 稀释至刻度,得样品供试液。精确量取一定量样品供试液,置25mL具塞比色管中,按标准曲线制备方法 测定,计算含量。