石斛 : 石斛为兰科植物金钗石斛Dendrobium nobile Lindl.、马鞭石斛D. fimbriatum Hook. var. oculatum Hook. 或铁皮石斛D. candidum Wall. ex Lindl. 及其近似种的新鲜或干燥茎。主要含有多糖类和生物碱类等成分。
多糖类有效部位及成分
【总多糖】
提取分离
工艺一:

【注1】 10倍量水煎煮3次,每次1小时。浓缩至1:1 (g/mL),加3倍量乙醇沉淀。
工艺二:

【注2】 药渣热水提4次,合并水提液,减压浓缩,加4倍95%乙醇静置过夜,滤过。
【注3】 收集沉淀物,依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤。
检识测定
苯酚-硫酸比色法
标准曲线制备: 精密称取葡萄糖对照品 (105℃干燥至恒重) 100mg,置100mL量瓶中,加水适量使溶 解,稀释至刻度,摇匀。精密吸取10mL置100mL量瓶中,用水稀释至刻度作为对照品溶液。精密吸取对 照品溶液100,200,……800μL,分别置试管中,加蒸馏水使成2mL,再各加苯酚试液1.0mL,摇匀,迅 速滴加浓硫酸5.0mL,迅速摇匀,放置5分钟,置沸水浴中加热15分钟,取出,冷水迅速冷却至室温; 另 以2mL蒸馏水同样操作,作空白对照,在490nm波长处测定吸光度,绘制标准曲线,计算回归方程:Y= 0.0076X+0.1543,r=0.999。
换算因素测定: 精密称取60℃干燥至恒重的石斛多糖2mg,置250mL量瓶中,用蒸馏水稀释至刻度, 摇匀,作贮备液。精密吸取贮备液300μL,按标准曲线制备方法,测定吸收度。另精密吸取葡萄糖对照品 溶液300μL(含葡萄糖30μg),同法操作,测定石斛多糖中葡萄糖浓度,按下式计算换算因素f。

样品测定: 精密称取石斛粗粉0.25g,置圆底烧瓶中,加80%乙醇100mL,回流提取1小时,趁热过 滤,药渣用8mL 80%热乙醇洗涤3次,药渣置圆底烧瓶中,加蒸馏水85mL,回流提取2小时,趁热过滤, 用5mL热水洗涤烧瓶和药渣,待冷却后移入250mL量瓶中,用蒸馏水稀释至刻度,混匀,精密吸取500μL 置试管中,加蒸馏水1.5mL,按标准曲线制备方法测定吸光度。同时另精密吸取葡萄糖对照品溶液500μL (含葡萄糖50μg),同法操作,测定吸光度,按下式计算样品中多糖含量:

C_S:供试品溶液的葡萄糖浓度 (μg/mL) D:供试品溶液的稀释因素 W:供试品重量
生物碱类有效部位及成分
【总生物碱】
提取分离

检识测定
方法一: 酸性染料比色法
标准曲线制备: 精称石斛碱对照品1mg,置100mL量瓶中,加氯仿至刻度。精取1.0,2.0,3.0,4.0, 5.0mL分别置于分液漏斗中,用氯仿稀释至10.0mL,加入pH4.5缓冲液5.0mL和0.04%溴甲酚绿溶液 2.0mL,剧烈振摇3分钟,静置30分钟,氯仿层通过经氯仿浸泡处理并干燥的药棉滤过。取续滤液5.0mL, 加0.01mol/L氢氧化钠无水乙醇溶液1.0mL,摇匀。以氯仿10.0mL,同法操作,作为空白对照,于620nm 处测定吸收度。计算回归方程为A=-0.01700+0.01035C (r=0.9993),石斛碱在9.8～49.0μg范围内呈 线性关系。
样品测定: 精取石斛粗粉0.5g,用适量氨水湿润,密封放置30分钟,精密加入氯仿10.0mL,置水浴 上加热回流2小时,冷却后称重,补足失重,过滤。精取续滤液1.0mL置10mL量瓶中,加氯仿至刻度, 摇匀,吸取2.0mL置25mL量瓶中,加氯仿稀释至刻度,摇匀,取10mL置分液漏斗中,按标准曲线制备方 法测定,计算含量。
方法二: 薄层色谱法

薄层色谱条件一览表

吸附剂	展 开 剂	对照品	显色方法	检测波长(nm)	检测药物
硅胶G	正丁醇-乙酸-水(4:1:5)上层	对照药材	改良碘化铋钾试液	*	金钗石斛

注: 加*号者仅为检识用。